Nature.com پر جانے کا شکریہ۔آپ جس براؤزر کا ورژن استعمال کر رہے ہیں اسے محدود CSS سپورٹ حاصل ہے۔بہترین تجربے کے لیے، ہم تجویز کرتے ہیں کہ آپ ایک اپ ڈیٹ شدہ براؤزر استعمال کریں (یا انٹرنیٹ ایکسپلورر میں مطابقت موڈ کو غیر فعال کریں)۔اس دوران، مسلسل تعاون کو یقینی بنانے کے لیے، ہم سائٹ کو بغیر اسٹائل اور جاوا اسکرپٹ کے رینڈر کریں گے۔
Toxoplasma gondii ایک انٹرا سیلولر پروٹوزوان پرجیوی ہے جو متاثرہ میزبان کے مائیکرو ماحولیات کو ماڈیول کرتا ہے اور اسے دماغ کے ٹیومر کی نشوونما کے واقعات سے وابستہ جانا جاتا ہے۔اس مطالعے میں، ہم قیاس کرتے ہیں کہ Toxoplasma انفیکشن سے exosomal miRNA-21 دماغ کے ٹیومر کی نشوونما کو فروغ دیتا ہے۔Toxoplasma سے متاثرہ BV2 مائکروگلیہ کے Exosomes کی خصوصیت کی گئی تھی اور U87 گلیوما خلیوں کے اندرونی ہونے کی تصدیق کی گئی تھی۔Toxoplasma gondii اور ٹیومر کی چھانٹی سے وابستہ microRNA اور microRNA-21A-5p کی صفوں کا استعمال کرتے ہوئے Exosomal مائکرو آر این اے ایکسپریشن پروفائلز کا تجزیہ کیا گیا۔ہم نے Exosomes میں miR-21 کی سطح کو تبدیل کرکے U87 glioma خلیات میں ٹیومر سے وابستہ جینوں کے mRNA کی سطح اور انسانی U87 glioma سیل کے پھیلاؤ پر exosomes کے اثر کی بھی چھان بین کی۔Toxoplasma gondii سے متاثر U87 glioma خلیات کے exosomes میں، microRNA-21 کے اظہار میں اضافہ ہوتا ہے اور antitumor genes (FoxO1، PTEN، اور PDCD4) کی سرگرمی کم ہوتی ہے۔Toxoplasma سے متاثر BV2 سے ماخوذ exosomes U87 گلیوما خلیوں کے پھیلاؤ کو اکساتے ہیں۔Exosomes ماؤس ٹیومر ماڈل میں U87 خلیوں کی نشوونما کا باعث بنتے ہیں۔ہم تجویز کرتے ہیں کہ Toxoplasma سے متاثرہ BV2 مائیکروگلیہ میں exosomal miR-21 میں اضافہ اینٹیٹیمر جینوں کو کم کرکے U87 گلیوما خلیوں میں سیل گروتھ پروموٹر کے طور پر اہم کردار ادا کرسکتا ہے۔
ایک اندازے کے مطابق 2018 میں دنیا بھر میں جدید ترین کینسر کے 18.1 ملین سے زیادہ کیسز کی تشخیص ہوئی، ہر سال تقریباً 297,000 مرکزی اعصابی نظام کے ٹیومر کی تشخیص ہوئی (تمام ٹیومر کا 1.6%)1۔پچھلی تحقیق سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ انسانی دماغ کے ٹیومر کی نشوونما کے خطرے کے عوامل میں مختلف کیمیائی مصنوعات، خاندانی تاریخ، اور سر کے علاج اور تشخیصی آلات سے آئنائزنگ ریڈی ایشن شامل ہیں۔تاہم، ان خرابیوں کی صحیح وجہ نامعلوم ہے.دنیا بھر میں ہونے والے تمام کینسروں میں سے تقریباً 20% متعدی ایجنٹوں کی وجہ سے ہوتے ہیں، جن میں وائرس، بیکٹیریا اور طفیلی 3,4 شامل ہیں۔متعدی پیتھوجینز میزبان خلیے کے جینیاتی طریقہ کار میں خلل ڈالتے ہیں، جیسے ڈی این اے کی مرمت اور سیل سائیکل، اور دائمی سوزش اور مدافعتی نظام کو نقصان پہنچا سکتے ہیں۔
انسانی کینسر سے وابستہ متعدی ایجنٹ سب سے عام وائرل پیتھوجینز ہیں جن میں ہیومن پیپیلوما وائرس اور ہیپاٹائٹس بی اور سی وائرس شامل ہیں۔پرجیوی انسانی کینسر کی نشوونما میں بھی ممکنہ کردار ادا کر سکتے ہیں۔کئی پرجیوی انواع، یعنی Schistosoma، Opishorchis viverrini، O. felineus، Clonorchis sinensis اور Hymenolepis nana، انسانی کینسر کی مختلف اقسام 6,7,8 میں ملوث ہیں۔
Toxoplasma gondii ایک انٹرا سیلولر پروٹوزوآن ہے جو متاثرہ میزبان خلیوں کے مائکرو ماحولیات کو منظم کرتا ہے۔یہ طفیلی دنیا کی تقریباً 30% آبادی کو متاثر کرنے کا تخمینہ ہے، جس سے پوری آبادی 9,10 خطرے میں ہے۔Toxoplasma gondii اہم اعضاء کو متاثر کر سکتا ہے، بشمول مرکزی اعصابی نظام (CNS)، اور مہلک گردن توڑ بخار اور انسیفلائٹس جیسی سنگین بیماریوں کا سبب بن سکتا ہے، خاص طور پر امیونوکمپرومائزڈ مریضوں میں9۔تاہم، Toxoplasma gondii مدافعتی صلاحیت رکھنے والے افراد میں خلیوں کی نشوونما اور مدافعتی ردعمل کو ماڈیول کر کے متاثرہ میزبان کے ماحول کو بھی تبدیل کر سکتا ہے، جس کے نتیجے میں غیر علامتی دائمی انفیکشن 9,11 کی بحالی ہوتی ہے۔دلچسپ بات یہ ہے کہ T. gondii کے پھیلاؤ اور دماغ کے ٹیومر کے واقعات کے درمیان ارتباط کو دیکھتے ہوئے، کچھ رپورٹس بتاتی ہیں کہ Vivo میں T. gondii انفیکشن کی وجہ سے ماحولیاتی تبدیلیاں ٹیومر مائکرو ماحولیات سے ملتی جلتی ہیں۔
Exosomes کو انٹر سیلولر کمیونیکیٹر کے نام سے جانا جاتا ہے جو حیاتیاتی مواد بشمول پروٹین اور نیوکلک ایسڈ، پڑوسی خلیوں سے پہنچاتے ہیں 16,17۔Exosomes ٹیومر سے متعلق حیاتیاتی عمل کو متاثر کر سکتے ہیں جیسے کہ ٹیومر مائکرو ماحولیات میں اینٹی اپوپٹوسس، انجیوجینیسیس اور میٹاسٹیسیس۔خاص طور پر، miRNAs (miRNAs)، چھوٹے نان کوڈنگ والے RNAs تقریباً 22 نیوکلیوٹائڈز لمبائی میں، اہم پوسٹ ٹرانسکرپشنی جین ریگولیٹرز ہیں جو miRNA-Induced silencing complex (miRISC) کے ذریعے 30% سے زیادہ انسانی mRNA کو کنٹرول کرتے ہیں۔Toxoplasma gondii متاثرہ میزبانوں میں miRNA اظہار کو کنٹرول کرکے حیاتیاتی عمل میں خلل ڈال سکتا ہے۔میزبان miRNAs میں پرجیوی کی بقا کی حکمت عملی کو حاصل کرنے کے لیے میزبان حیاتیاتی عمل کو منظم کرنے کے لیے اہم اشارے ہوتے ہیں۔اس طرح، T. gondii کے انفیکشن کے بعد میزبان miRNA پروفائل میں تبدیلیوں کا مطالعہ کرنے سے ہمیں میزبان اور T. gondii کے درمیان تعامل کو زیادہ واضح طور پر سمجھنے میں مدد مل سکتی ہے۔درحقیقت، تھروگننم وغیرہ۔15 نے تجویز کیا کہ T. gondii ٹیومر کی نشوونما سے وابستہ مخصوص میزبان miRNAs پر اپنے اظہار کو تبدیل کرکے دماغی کینسر کو فروغ دیتا ہے اور پتہ چلا کہ T. gondii تجرباتی جانوروں میں گلیوماس کا سبب بن سکتا ہے۔
یہ مطالعہ Toxoplasma BV2 سے متاثرہ میزبان مائکروگلیہ میں exosomal miR-21 کی تبدیلی پر مرکوز ہے۔ہم نے FoxO1/p27 کے نیوکلئس میں برقرار رہنے کی وجہ سے U87 گلیوما خلیوں کی نشوونما میں تبدیل شدہ exosomal miR-21 کے ممکنہ کردار کا مشاہدہ کیا، جو overexpressed miR-21 کا ہدف ہے۔
BV2 سے اخذ کردہ Exosomes تفریق سینٹرفیوگریشن کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیے گئے تھے اور سیلولر اجزاء یا دیگر vesicles کے ساتھ آلودگی کو روکنے کے لیے مختلف طریقوں سے ان کی توثیق کی گئی تھی۔SDS-polyacrylamide جیل الیکٹروفورسس (SDS-PAGE) نے BV2 خلیوں اور exosomes (شکل 1A) سے نکالے گئے پروٹینوں کے درمیان الگ الگ نمونے دکھائے، اور ایلکس کی موجودگی کے لیے نمونوں کا اندازہ لگایا گیا، جس کا تجزیہ 2017 میں exosomal پروٹین مارکر کے مغربی بلوٹنگ کے ذریعے کیا گیا۔ایلکس لیبلنگ exosome پروٹینز میں پائی گئی لیکن BV2 سیل lysate پروٹین (تصویر 1B) میں نہیں۔اس کے علاوہ، BV2 سے اخذ کردہ exosomes سے پاک RNA کا بائیو اینالائزر کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔18S اور 28S ribosomal subunits کو exosomal RNA ہجرت کے پیٹرن میں شاذ و نادر ہی دیکھا گیا تھا، جو قابل اعتماد پاکیزگی کی نشاندہی کرتا ہے (شکل 1C)۔آخر میں، ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی نے ظاہر کیا کہ مشاہدہ شدہ exosomes تقریباً 60-150 nm سائز کے تھے اور ایک کپ جیسا ڈھانچہ تھا جو exosome morphology (تصویر 1D) کی مخصوص تھی۔
BV2 خلیوں سے اخذ کردہ exosomes کی خصوصیت۔(A) حفاظتی ڈیٹا شیٹ کا صفحہ۔پروٹین کو BV2 خلیوں یا BV2 سے اخذ کردہ exosomes سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔پروٹین پیٹرن خلیات اور exosomes کے درمیان مختلف ہیں.(B) ایک exosomal مارکر (Alix) کا مغربی بلاٹ تجزیہ۔(C) بائیو اینالائزر کا استعمال کرتے ہوئے BV2 خلیات اور BV2 اخذ کردہ exosomes سے پیوریفائیڈ RNA کی تشخیص۔اس طرح، BV2 خلیوں میں 18S اور 28S رائبوسومل ذیلی یونٹس شاذ و نادر ہی exosomal RNA میں پائے گئے۔(D) ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی سے پتہ چلتا ہے کہ BV2 خلیوں سے الگ تھلگ exosomes 2% uranyl acetate کے ساتھ منفی طور پر داغدار تھے۔Exosomes تقریباً 60-150 nm سائز اور کپ کے سائز کے ہوتے ہیں (گانا اور جنگ، غیر مطبوعہ ڈیٹا)۔
U87 انسانی گلیوما خلیوں میں BV2 سے ماخوذ exosomes کے سیلولر انٹرنلائزیشن کو کنفوکل مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے دیکھا گیا۔PKH26 لیبل والے exosomes U87 خلیوں کے cytoplasm میں مقامی ہوتے ہیں۔نیوکلی کو DAPI (تصویر 2A) سے داغ دیا گیا تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ BV2 سے ماخوذ exosomes کو میزبان خلیوں کے ذریعے اندرونی بنایا جا سکتا ہے اور وصول کنندہ خلیوں کے ماحول کو متاثر کیا جا سکتا ہے۔
BV2 سے ماخوذ exosomes کو U87 glioma خلیات میں داخل کرنا اور Toxoplasma RH سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes U87 glioma خلیات کا پھیلاؤ۔(A) کنفوکل مائکروسکوپی کے ذریعہ ماپا جانے والے U87 خلیوں کے ذریعہ گھیرے ہوئے Exosomes۔U87 گلیوما خلیوں کو PKH26 (سرخ) کے ساتھ لیبل والے exosomes کے ساتھ یا 24 گھنٹے تک کنٹرول کے بغیر لگائے گئے تھے۔نیوکلی کو DAPI (نیلے) سے داغ دیا گیا تھا اور پھر اسے کنفوکال مائکروسکوپ (اسکیل بار: 10 μm، x 3000) کے تحت دیکھا گیا تھا۔(B) U87 گلیوما سیل پھیلاؤ کا تعین سیل پھیلاؤ پرکھ کے ذریعہ کیا گیا تھا۔U87 گلیوما خلیوں کا اشارہ وقت کے لئے exosomes کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے P <0.05۔ *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پی <0.05 * P < 0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا۔
U87 گلیوما خلیوں میں BV2 سے ماخوذ exosomes کے اندرونی ہونے کی تصدیق کرنے کے بعد، ہم نے انسانی گلیوما خلیوں کی نشوونما میں BV2 سے ماخوذ Toxoplasma سے ماخوذ exosomes کے کردار کی چھان بین کے لیے سیل کے پھیلاؤ کی جانچ کی۔T. gondii-infected BV2 خلیات سے exosomes کے ساتھ U87 خلیوں کے علاج سے پتہ چلتا ہے کہ T. gondii-infected BV2 سے ماخوذ exosomes کنٹرول کے مقابلے U87 خلیات کے نمایاں طور پر زیادہ پھیلاؤ کا سبب بنتے ہیں (تصویر 2B)۔
اس کے علاوہ، U118 خلیوں کی نشوونما کے نتائج وہی تھے جو U87 تھے، جیسا کہ Toxoplasma کی حوصلہ افزائی exosomes کے پھیلاؤ کی بلند ترین سطح کا سبب بنتا ہے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ان اعداد و شمار کی بنیاد پر، ہم اس بات کی نشاندہی کر سکتے ہیں کہ BV2 سے ماخوذ Toxoplasma-infected exosomes گلیوما سیل کے پھیلاؤ میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔
ٹیومر کی نشوونما پر Toxoplasma سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes کے اثر کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے U87 glioma خلیات کو ایک xenograft ماڈل کے لیے عریاں چوہوں میں انجکشن لگایا اور BV2 سے ماخوذ exosomes یا RH سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes کا انجکشن لگایا۔1 ہفتہ کے بعد ٹیومر ظاہر ہونے کے بعد، 5 چوہوں کے ہر تجرباتی گروپ کو ٹیومر کے سائز کے مطابق اسی نقطہ آغاز کا تعین کرنے کے لیے تقسیم کیا گیا، اور ٹیومر کا سائز 22 دن تک ناپا گیا۔
U87 زینوگرافٹ ماڈل والے چوہوں میں، BV2 سے ماخوذ RH-infected exosome گروپ میں 22 دن (تصویر 3A,B) میں ٹیومر کا بڑا سائز اور وزن دیکھا گیا۔دوسری طرف، BV2 سے ماخوذ exosome گروپ اور exosome علاج کے بعد کنٹرول گروپ کے درمیان ٹیومر کے سائز میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔مزید برآں، گلیوما سیلز اور ایکزوسومز کے ساتھ لگائے گئے چوہوں نے بصری طور پر RH سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes (تصویر 3C) کے گروپ میں ٹیومر کا سب سے بڑا حجم ظاہر کیا۔یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ BV2 سے ماخوذ ٹاکسوپلازما سے متاثرہ exosomes ماؤس کے ٹیومر ماڈل میں گلیوما کی نشوونما کا باعث بنتے ہیں۔
U87 xenograft ماؤس ماڈل میں BV2 سے ماخوذ exosomes کا Oncogenesis (AC)۔ٹیومر کے سائز (A) اور وزن (B) میں BALB/c عریاں چوہوں میں نمایاں طور پر اضافہ کیا گیا تھا جس کا علاج BV2 سے حاصل کردہ RH سے متاثرہ exosomes کے ساتھ کیا گیا تھا۔BALB/c عریاں چوہوں (C) کو میٹریجل مکسچر میں معطل 1 x 107 U87 خلیوں کے ساتھ subcutaneously انجکشن لگایا گیا تھا۔انجیکشن کے چھ دن بعد، چوہوں میں 100 μg BV2 سے ماخوذ exosomes کا علاج کیا گیا۔ٹیومر کا سائز اور وزن بالترتیب بتائے گئے دنوں اور قربانی کے بعد ماپا گیا۔ *پی <0.05۔ *پی <0.05۔ *R <0,05۔ *پی <0.05۔ *پی <0.05۔ *پی <0.05۔ *R <0,05۔ *پی <0.05۔
اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ مدافعتی یا ٹیومر کی نشوونما سے وابستہ 37 miRNAs (16 overexpressed اور 21 downexpressed) Toxoplasma RH سٹرین (تصویر 4A) کے انفیکشن کے بعد مائکروگلیہ میں نمایاں طور پر تبدیل ہوئے تھے۔تبدیل شدہ miRNAs کے درمیان miR-21 کے متعلقہ اظہار کی سطح کی تصدیق BV2 سے اخذ کردہ exosomes، BV2 اور U87 خلیوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے exosomes میں ریئل ٹائم RT-PCR کے ذریعے ہوئی۔miR-21 کے اظہار نے Toxoplasma gondii (RH strain) (تصویر 4B) سے متاثرہ BV2 خلیوں سے exosomes میں نمایاں اضافہ دکھایا۔BV2 اور U87 خلیات میں miR-21 کے متعلقہ اظہار کی سطح تبدیل شدہ exosomes (تصویر 4B) کے استعمال کے بعد بڑھ گئی۔ٹیومر کے مریضوں اور Toxoplasma gondii (ME49 سٹرین) سے متاثرہ چوہوں کے دماغی ٹشوز میں miR-21 اظہار کی نسبتہ سطح بالترتیب کنٹرول سے زیادہ تھی (تصویر 4C)۔یہ نتائج وٹرو اور ویوو میں پیشن گوئی اور تصدیق شدہ مائیکرو آر این اے کے اظہار کی سطح کے درمیان فرق کے ساتھ منسلک ہیں۔
Toxoplasma gondii (RH) سے متاثرہ مائکروگلیہ میں exosomal miP-21a-5p کے اظہار میں تبدیلیاں۔(A) T. gondii RH انفیکشن کے بعد استثنیٰ یا ٹیومر کی نشوونما سے وابستہ siRNA میں نمایاں تبدیلیوں کو ظاہر کرتا ہے۔(B) رشتہ دار miR-21 اظہار کی سطحوں کا پتہ ریئل ٹائم RT-PCR کے ذریعہ BV2 سے ماخوذ exosomes، BV2 سے علاج شدہ exosomes، اور U87 خلیوں میں پایا گیا۔(C) رشتہ دار miR-21 اظہار کی سطح ٹیومر کے مریضوں (N = 3) اور Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N = 3) سے متاثرہ چوہوں کے دماغی ؤتکوں میں پائی گئی۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا تھا۔ *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پی <0.05 * پی <0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا۔
RH سے متاثرہ BV2 خلیات سے Exosomes Vivo اور in Vitro (تصویر 2, 3) میں گلیوماس کی نشوونما کا باعث بنے۔متعلقہ mRNAs کا پتہ لگانے کے لیے، ہم نے BV2 یا RH BV2 سے اخذ کردہ exosomes سے متاثر U87 خلیوں میں اینٹیٹیمر ٹارگٹ جینز، فورک ہیڈ باکس O1 (FoxO1)، PTEN، اور پروگرامڈ سیل ڈیتھ 4 (PDCD4) کی mRNA لیولز کی جانچ کی۔بایو انفارمیٹکس کے تجزیے سے معلوم ہوا ہے کہ ٹیومر سے وابستہ کئی جین، بشمول FoxO1، PTEN، اور PDCD4 جینز، miR-2121,22 بائنڈنگ سائٹس رکھتے ہیں۔BV2 سے ماخوذ exosomes (تصویر 5A) کے مقابلے RH سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes میں اینٹی ٹیومر ٹارگٹ جین کی mRNA کی سطح کم ہو گئی تھی۔FoxO1 نے BV2 سے ماخوذ exosomes (شکل 5B) کے مقابلے RH سے متاثرہ BV2 سے ماخوذ exosomes میں پروٹین کی سطح کو کم دکھایا۔ان نتائج کی بنیاد پر، ہم اس بات کی تصدیق کر سکتے ہیں کہ RH-infected BV2 سے اخذ کردہ exosomes ٹیومر کی نشوونما میں اپنے کردار کو برقرار رکھتے ہوئے، اینٹی آنکوجینک جین کو کم کرتے ہیں۔
Toxoplasma RH-infected BV2 سے ماخوذ exosomes Toxoplasma RH-infected BV2 سے ماخوذ exosomes کے ذریعے U87 گلیوما خلیات میں اینٹی ٹیومر جینز کو دبانے کا باعث بنتے ہیں۔(A) PBS exosomes کے مقابلے T. gondii RH-infected BV2 سے اخذ کردہ exosomes میں FoxO1، PTEN اور PDCD4 اظہار کا ریئل ٹائم PCR۔β-actin mRNA کو بطور کنٹرول استعمال کیا جاتا تھا۔(B) FoxO1 اظہار کا تعین مغربی بلوٹنگ کے ذریعہ کیا گیا تھا اور امیج جے پروگرام کا استعمال کرتے ہوئے کثافت کے اعداد و شمار کا شماریاتی طور پر جائزہ لیا گیا تھا۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے حاصل کیا گیا تھا۔ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا تھا۔ *P <0.05 通过学生t 检验获得. *پی <0.05 * پی <0,05، полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا۔
ٹیومر سے وابستہ جین ریگولیشن پر exosomes میں miP-21 کے اثر کو سمجھنے کے لئے، U87 خلیوں کو Lipofectamine 2000 کا استعمال کرتے ہوئے miP-21 کے ایک روکنے والے کے ساتھ تبدیل کیا گیا تھا اور خلیات کو منتقلی کے 24 گھنٹے بعد کاٹا گیا تھا۔miR-21 inhibitors کے ساتھ منتقلی والے خلیوں میں FoxO1 اور p27 اظہار کی سطحوں کا موازنہ qRT-PCR (تصویر 6A,B) کا استعمال کرتے ہوئے BV2 سے ماخوذ exosomes کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں سے کیا گیا۔miR-21 inhibitor کی U87 خلیوں میں منتقلی نے FoxO1 اور p27 اظہار کو نمایاں طور پر کم کر دیا (تصویر 6)۔
RH سے متاثرہ exosomal BV2 سے ماخوذ miP-21 نے U87 گلیوما خلیوں میں FoxO1/p27 اظہار کو تبدیل کیا۔U87 خلیوں کو Lipofectamine 2000 کا استعمال کرتے ہوئے miP-21 inhibitor کے ساتھ منتقل کیا گیا تھا اور خلیات کو منتقلی کے 24 گھنٹے بعد کاٹا گیا تھا۔miR-21 inhibitors کے ساتھ منتقلی والے خلیوں میں FoxO1 اور p27 اظہار کی سطحوں کا موازنہ qRT-PCR (A, B) کا استعمال کرتے ہوئے BV2 سے ماخوذ exosomes کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں کی سطحوں سے کیا گیا۔
میزبان کے مدافعتی ردعمل سے بچنے کے لیے، Toxoplasma پرجیوی ٹشو سسٹ میں تبدیل ہو جاتا ہے۔وہ میزبان کی پوری زندگی میں دماغ، دل اور کنکال کے پٹھوں سمیت مختلف ٹشوز کو پرجیوی بناتے ہیں اور میزبان کے مدافعتی ردعمل کو ماڈیول کرتے ہیں۔اس کے علاوہ، وہ سیل سائیکل اور میزبان خلیوں کے اپوپٹوسس کو منظم کر سکتے ہیں، ان کے پھیلاؤ کو فروغ دیتے ہیں 14,24۔Toxoplasma gondii بنیادی طور پر میزبان ڈینڈریٹک خلیات، نیوٹروفیلز، اور monocyte/macrophage نسب بشمول دماغی مائکروگلیہ کو متاثر کرتا ہے۔Toxoplasma gondii M2 فینوٹائپ کے میکروفیجز کے فرق کو آمادہ کرتا ہے، پیتھوجین انفیکشن کے بعد زخم کی شفا یابی کو متاثر کرتا ہے، اور ہائپر واسکولرائزیشن اور گرینولوومیٹوس فبروسس سے بھی وابستہ ہے۔Toxoplasma انفیکشن کے اس رویے کے روگجنن کا تعلق ٹیومر کی نشوونما سے وابستہ مارکر سے ہو سکتا ہے۔Toxoplasma کی طرف سے ریگولیٹ کردہ مخالف ماحول متعلقہ precancer سے مشابہت رکھتا ہے۔لہذا، یہ فرض کیا جا سکتا ہے کہ Toxoplasma انفیکشن دماغ کے ٹیومر کی ترقی میں حصہ لے.درحقیقت، دماغ کے مختلف ٹیومر والے مریضوں کے سیرم میں ٹاکسوپلازما انفیکشن کی اعلی شرح کی اطلاع ملی ہے۔اس کے علاوہ، Toxoplasma gondii ایک اور سرطان پیدا کرنے والا اثر ہوسکتا ہے اور دوسرے متعدی سرطان پیدا کرنے والے دماغی رسولیوں کی نشوونما میں مدد کے لیے ہم آہنگی سے کام کرتا ہے۔اس سلسلے میں یہ بات قابل غور ہے کہ P. falciparum اور Epstein-Barr وائرس ہم آہنگی سے Burkitt's lymphoma کی تشکیل میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔
کینسر کی تحقیق کے میدان میں ریگولیٹرز کے طور پر exosomes کے کردار کی بڑے پیمانے پر چھان بین کی گئی ہے۔تاہم، پرجیویوں اور متاثرہ میزبانوں کے درمیان exosomes کے کردار کو اچھی طرح سے سمجھا نہیں جاتا ہے۔اب تک، مختلف ریگولیٹرز، بشمول خفیہ پروٹین، حیاتیاتی عمل کی وضاحت کر چکے ہیں جن کے ذریعے پروٹوزوان پرجیوی میزبان کے حملے کے خلاف مزاحمت کرتے ہیں اور انفیکشن کو برقرار رکھتے ہیں۔حال ہی میں، ایک بڑھتا ہوا تصور سامنے آیا ہے کہ پروٹوزوان سے وابستہ مائیکرو ویسکلز اور ان کے مائیکرو آر این اے میزبان خلیوں کے ساتھ تعامل کرتے ہیں تاکہ ان کی بقا کے لیے سازگار ماحول پیدا ہو۔لہذا، تبدیل شدہ exosomal miRNAs اور گلیوما سیل پھیلاؤ کے درمیان تعلق کو دریافت کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔مائیکرو آر این اے کی تبدیلی (کلسٹر جینز miR-30c-1، miR-125b-2، miR-23b-27b-24-1 اور miR-17-92) ٹاکسوپلازما سے متاثرہ انسانی میکروفیجز میں STAT3 پروموٹر سے منسلک ہوتا ہے، ریگولیٹ ہوتا ہے اور اینٹی اینٹی آکسائیڈ کرتا ہے۔ ٹوکسوپلاسما گونڈی انفیکشن 29 کے جواب میں اپوپٹوسس۔ٹاکسوپلازما انفیکشن miR-17-5p اور miR-106b-5p کے اظہار کو بڑھاتا ہے، جو کئی ہائپرپرولیفیریٹو بیماریوں سے وابستہ ہیں۔یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ ٹاکسوپلازما انفیکشن کے ذریعہ ریگولیٹ کردہ میزبان ایم آر این اے میزبان حیاتیاتی رویے میں پرجیویوں کی بقا اور روگجنن کے لئے اہم مالیکیول ہیں۔
تبدیل شدہ miRNAs مہلک خلیوں کی شروعات اور ترقی کے دوران مختلف قسم کے طرز عمل کو متاثر کر سکتے ہیں، بشمول گلیوماس: نمو کے اشاروں کی خود کفالت، نمو کو روکنے والے سگنلز کے لیے غیر حساسیت، اپوپٹوسس کی چوری، لامحدود نقل کی صلاحیت، انجیوجینیسیس، یلغار اور میٹاسٹیسیس، اور inflammation۔گلیوما میں، کئی ایکسپریشن پروفائلنگ اسٹڈیز میں تبدیل شدہ miRNAs کی نشاندہی کی گئی ہے۔
موجودہ مطالعے میں، ہم نے ٹاکسوپلازما سے متاثرہ میزبان خلیوں میں miRNA-21 اظہار کی اعلی سطح کی تصدیق کی۔miR-21 کی شناخت ٹھوس ٹیومر میں کثرت سے زیادہ متاثر ہونے والے مائیکرو آر این اے کے طور پر کی گئی ہے، بشمول گلیوماس، 33 اور اس کا اظہار گلیوما کے درجے سے تعلق رکھتا ہے۔جمع ہونے والے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ miR-21 ایک ناول آنکوجین ہے جو گلیوما کی نشوونما میں ایک اینٹی اپوپٹوٹک عنصر کے طور پر کام کرتا ہے اور انسانی دماغ کی خرابی کے ٹشوز اور پلازما میں بہت زیادہ متاثر ہوتا ہے۔دلچسپ بات یہ ہے کہ گلیوما سیلز اور ٹشوز میں miR-21 کا غیر فعال ہونا کیسپیس پر منحصر اپوپٹوسس کی وجہ سے سیل کے پھیلاؤ کو روکتا ہے۔miR-21 کے پیش گوئی شدہ اہداف کے بائیو انفارمیٹک تجزیہ سے apoptosis کے راستے سے وابستہ متعدد ٹیومر دبانے والے جینوں کا انکشاف ہوا، بشمول پروگرامڈ سیل ڈیتھ 4 (PDCD4)، tropomyosin (TPM1)، PTEN، اور فورک ہیڈ باکس O1 (FoxO1)، miR-2121 بائنڈنگ سائٹ کے ساتھ۔.22.38.
FoxO1، ٹرانسکرپشن فیکٹرز (FoxO) میں سے ایک کے طور پر، انسانی کینسر کی مختلف اقسام کی نشوونما میں ملوث ہے اور ٹیومر دبانے والے جینز جیسے p21، p27، Bim، اور FasL40 کے اظہار کو منظم کر سکتا ہے۔FoxO1 سیل سائیکل انحیبیٹرز جیسے p27 کو پابند اور فعال کر سکتا ہے تاکہ سیل کی نشوونما کو روکا جا سکے۔مزید برآں، FoxO1 PI3K/Akt سگنلنگ کا ایک اہم اثر ہے اور p2742 ٹرانسکرپشن کو چالو کرنے کے ذریعے بہت سے حیاتیاتی عمل جیسے سیل سائیکل پروگریشن اور سیل کی تفریق کو منظم کرتا ہے۔
آخر میں، ہم سمجھتے ہیں کہ Toxoplasma-infected microglia سے ماخوذ exosomal miR-21 گلیوما سیلز کی نمو ریگولیٹر کے طور پر اہم کردار ادا کر سکتا ہے (تصویر 7)۔تاہم، exosomal miR-21، تبدیل شدہ Toxoplasma انفیکشن، اور glioma کی ترقی کے درمیان براہ راست تعلق تلاش کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔توقع کی جاتی ہے کہ یہ نتائج ٹاکسوپلازما انفیکشن اور گلیوما کے واقعات کے درمیان تعلق کا مطالعہ کرنے کے لیے ایک نقطہ آغاز فراہم کریں گے۔
اس مطالعہ میں گلیوما (دماغ) سرطان پیدا کرنے کے طریقہ کار کا ایک اسکیمیٹک خاکہ تجویز کیا گیا ہے۔مصنف پاورپوائنٹ 2019 (Microsoft, Redmond, WA) میں ڈرا کرتا ہے۔
اس مطالعے میں تمام تجرباتی پروٹوکول، بشمول جانوروں کے استعمال، سیول نیشنل یونیورسٹی اینیمل کیئر اینڈ یوزر کمیٹی کے معیاری اخلاقی رہنما خطوط کے مطابق تھے اور سیول نیشنل یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن کے ادارہ جاتی جائزہ بورڈ (IRB نمبر SNU- 150715)۔-2)۔تمام تجرباتی طریقہ کار ARRIVE کی سفارشات کے مطابق انجام دیئے گئے تھے۔
BV2 ماؤس مائیکروگلیہ اور U87 انسانی گلیوما خلیات Dulbecco کے Modified Eagles Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) اور Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) میں بالترتیب کلچر کیے گئے تھے، ہر ایک میں 10% فیٹل بووائن سیرم، ml-4. گلوٹامین، 0.2 ایم ایم پینسلن اور 0.05 ایم ایم اسٹریپٹومائسن۔خلیوں کو 37 ° C پر 5% CO2 کے ساتھ ایک انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ایک اور گلیوما سیل لائن، U118، U87 خلیوں کے ساتھ موازنہ کے لیے استعمال کی گئی تھی۔
T. gondii-infected RH اور ME49 strains سے exosomes کو الگ تھلگ کرنے کے لیے، T. gondii tachyzoites (RH strain) کو 3-4 دن پہلے انجکشن لگائے گئے 6 ہفتے پرانے BALB/c چوہوں کے پیٹ کی گہا سے کاٹا گیا تھا۔Tachyzoites کو PBS کے ساتھ تین بار دھویا گیا اور 40% پرکول (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43 میں سینٹرفیوگریشن کے ذریعے پاک کیا گیا۔تناؤ ME49 کے tachyzoites حاصل کرنے کے لیے، BALB/c چوہوں کو 20 ٹشو سسٹ کے ساتھ انٹراپریٹونلی انجکشن لگایا گیا تھا اور انفیکشن (PI) کے بعد 6-8 ویں دن پیٹ کی گہا کو دھو کر سسٹوں میں ٹاکیزائٹ کی تبدیلی جمع کی گئی تھی۔چوہے پی بی ایس سے متاثر ہیں۔ME49 tachyzoites 100 μg/ml penicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA)، 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL)، اور 5% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) کے ساتھ اضافی خلیوں میں اگائے گئے تھے۔ ..، USA) 37 ° C اور 5% کاربن ڈائی آکسائیڈ پر۔ویرو سیلز میں کاشت کے بعد، ME49 tachyzoites کو دو بار 25 گیج کی سوئی کے ذریعے اور پھر 5 µm فلٹر کے ذریعے ملبہ اور خلیات کو ہٹانے کے لیے منتقل کیا گیا۔دھونے کے بعد، tachyzoites کو PBS44 میں دوبارہ معطل کر دیا گیا۔Toxoplasma gondii strain ME49 کے ٹشو سسٹس کو متاثرہ C57BL/6 چوہوں (اورینٹ بائیو اینیمل سینٹر، سیونگنم، کوریا) کے دماغ سے الگ تھلگ سسٹوں کے انٹراپریٹونیل انجیکشن کے ذریعے برقرار رکھا گیا تھا۔ME49 سے متاثرہ چوہوں کے دماغ PI کے 3 ماہ کے بعد کاٹے گئے اور سسٹوں کو الگ تھلگ کرنے کے لیے ایک خوردبین کے نیچے کیما بنایا گیا۔متاثرہ چوہوں کو سیول نیشنل یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن میں خصوصی روگزن سے پاک حالات (SPF) کے تحت رکھا گیا تھا۔
مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق miRNeasy Mini Kit (Qiagen، Hilden، Germany) کا استعمال کرتے ہوئے BV2 سے ماخوذ exosomes، BV2 سیلز اور ٹشوز سے کل RNA نکالا گیا تھا، بشمول elution step کے لیے انکیوبیشن ٹائم۔آر این اے کی حراستی کا تعین نینو ڈراپ 2000 سپیکٹرو فوٹومیٹر پر کیا گیا تھا۔آر این اے مائیکرو رے کے معیار کا اندازہ Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔
10% exosome-poor FBS کے ساتھ DMEM 100,000g پر 16 گھنٹے کے لیے 4°C پر تیار کیا گیا اور 0.22 µm فلٹر (Nalgene, Rochester, NY, USA) کے ذریعے فلٹر کیا گیا۔BV2 خلیات، 5 × 105، DMEM میں کلچر کیے گئے تھے جن میں 10% exosome-depleted FBS اور 1% اینٹی بائیوٹکس 37°C اور 5% CO2 پر مشتمل تھے۔انکیوبیشن کے 24 گھنٹوں کے بعد ، تناؤ RH یا ME49 (MOI = 10) کے tachyzoites کو خلیوں میں شامل کیا گیا اور غیر حملہ آور پرجیویوں کو ایک گھنٹے کے اندر ہٹا دیا گیا اور DMEM کے ساتھ دوبارہ بھر دیا گیا۔BV2 خلیوں کے Exosomes کو ترمیم شدہ تفریق سینٹرفیوگریشن کے ذریعہ الگ تھلگ کیا گیا تھا، جو سب سے زیادہ استعمال شدہ طریقہ ہے۔RNA یا پروٹین کے تجزیہ کے لیے exosome pellet کو 300 μl PBS میں دوبارہ بند کریں۔الگ تھلگ exosomes کے ارتکاز کا تعین BCA پروٹین پرکھ کٹ (Pierce, Rockford, IL, USA) اور NanoDrop 2000 spectrophotometer کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔
BV2 سیلز یا BV2 سے اخذ کردہ exosomes کو PRO-PREP™ پروٹین ایکسٹرکشن سلوشن (iNtRon بایوٹیکنالوجی، Seongnam، Korea) میں لیس کیا گیا تھا اور پروٹین کو کوماسی شاندار نیلے داغ والے 10% SDS پولی کریلامائڈ جیلوں پر لاد دیا گیا تھا۔اس کے علاوہ، پروٹین کو PVDF جھلیوں میں 2 گھنٹے کے لیے منتقل کیا گیا۔الیکس اینٹی باڈی (سیل سگنلنگ ٹکنالوجی، بیورلی، ایم اے، یو ایس اے) کو بطور ایکسوسومل مارکر استعمال کرتے ہوئے مغربی دھبوں کی توثیق کی گئی۔HRP-conjugated goat anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) اور LAS-1000 پلس luminescent امیج اینالائزر (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) کو سیکنڈری اینٹی باڈی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔.ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی exosomes کے سائز اور مورفولوجی کا مطالعہ کرنے کے لئے انجام دیا گیا تھا.BV2 خلیات (6.40 µg/µl) سے الگ تھلگ Exosomes کاربن لیپت میشوں پر تیار کیے گئے تھے اور 1 منٹ کے لیے 2% یورینیل ایسیٹیٹ کے ساتھ منفی طور پر داغے ہوئے تھے۔ES1000W Erlangshen CCD کیمرے (Gatan, Pleasanton, CA, USA) سے لیس JEOL 1200-EX II (ٹوکیو، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے تیار کردہ نمونے 80 kV کے تیز رفتار وولٹیج پر دیکھے گئے۔
BV2 سے ماخوذ exosomes کو PKH26 ریڈ فلوروسینٹ لنکر کٹ (سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ تک داغ دیا گیا۔U87 خلیات، 2×105، PKH26 لیبل والے exosomes (سرخ) کے ساتھ یا منفی کنٹرول کے طور پر کوئی exosomes نہیں ہیں، 5% CO2 انکیوبیٹر میں 24 گھنٹے کے لیے 37 ° C پر انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔U87 سیل نیوکلی کو DAPI (نیلا) سے داغ دیا گیا تھا، U87 خلیوں کو 4% paraformaldehyde میں 15 منٹ کے لیے 4° C پر طے کیا گیا تھا اور پھر Leica TCS SP8 STED CW کنفوکل مائکروسکوپ سسٹم (Leica Microsystems، Mannheim، Germany) میں تجزیہ کیا گیا تھا۔قابل مشاہدہ
سی ڈی این اے کو میر-ایکس سی آر این اے فرسٹ اسٹرینڈ ترکیب اور SYBR qRT-PCR کٹ (Takara Bio Inc.، Shiga، Japan) کا استعمال کرتے ہوئے siRNA سے ترکیب کیا گیا تھا۔ریئل ٹائم مقداری PCR iQ5 ریئل ٹائم PCR پتہ لگانے کے نظام (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے پرائمر اور ٹیمپلیٹس کو SYBR پریمکس کے ساتھ ملا کر انجام دیا گیا۔ڈی این اے کو 15 سیکنڈ کے لیے 95 ڈگری سینٹی گریڈ پر ڈینیچریشن کے 40 چکروں کے لیے بڑھایا گیا تھا اور 60 سیکنڈ کے لیے 60 ڈگری سینٹی گریڈ پر اینیلنگ کیا گیا تھا۔IQ™5 آپٹیکل سسٹم سافٹ ویئر (Bio-Rad) کے ڈیٹا تجزیہ ماڈیول کا استعمال کرتے ہوئے ہر PCR ردعمل کے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔منتخب ہدف جینوں اور β-actin/siRNA (اور U6) کے درمیان جین کے اظہار میں متعلقہ تبدیلیوں کا حساب معیاری منحنی طریقہ استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔استعمال شدہ پرائمر ترتیب جدول 1 میں دکھائے گئے ہیں۔
3 x 104 U87 گلیوما خلیات کو 96 کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا اور BV2 (50 μg/mL) سے حاصل کردہ Toxoplasma-infected exosomes کے ساتھ ملایا گیا تھا یا BV2 (50 μg/mL) سے حاصل کردہ نان پلس exosomes کو 12، 18 اور 13 گھنٹے پر کنٹرول کیا گیا تھا۔ .سیل کے پھیلاؤ کی شرح کا تعین سیل کاؤنٹنگ کٹ-8 (ڈوجنڈو، کماموٹو، جاپان) (ضمنی اعداد و شمار S1-S3) 46 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔
5 ہفتے کی عمر کی خاتون BALB/c عریاں چوہوں کو Orient Bio (Seongnam-si، South Korea) سے خریدا گیا تھا اور کمرے کے درجہ حرارت (22 ± 2 ° C) اور نمی (45 ± 15 ° C) پر انفرادی طور پر جراثیم سے پاک پنجروں میں رکھا گیا تھا۔%) کمرے کے درجہ حرارت پر (22±2°C) اور نمی (45±15%)۔ایس پی ایف (سیول نیشنل یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن اینیمل سینٹر) کے تحت 12 گھنٹے کا لائٹ سائیکل اور 12 گھنٹے کا ڈارک سائیکل انجام دیا گیا۔چوہوں کو تصادفی طور پر 5 چوہوں کے تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا اور تمام گروپوں کو 400 ملی لیٹر پی بی ایس کے ساتھ 1 x 107 U87 گلیوما خلیات اور نمو کے عنصر نے BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA) کو کم کیا تھا۔ٹیومر کے انجیکشن کے چھ دن بعد، BV2 خلیوں سے حاصل کردہ 200 mg exosomes (بغیر ٹوکسوپلازما انفیکشن کے) ٹیومر کی جگہ پر انجیکشن لگائے گئے۔ٹیومر کے انفیکشن کے بائیس دن بعد، ہر گروپ میں چوہوں کے ٹیومر کا سائز ہفتے میں تین بار کیلیپر سے ماپا جاتا تھا، اور ٹیومر کے حجم کا حساب فارمولے سے کیا جاتا تھا: 0.5×(چوڑائی)×2×لمبائی۔
miRCURYTM LNA miRNA array کا استعمال کرتے ہوئے MicroRNA اظہار تجزیہ، 7th جنریشن ہے، mmu اور rno arrays (EXIQON، Vedbaek، Denmark) جس میں 3100 انسانوں، ماؤس اور چوہے miRNA کیپچر پروب میں 1119 اچھی خصوصیات والے چوہوں کا احاطہ کیا گیا ہے۔اس طریقہ کار کے دوران، 250 سے 1000 این جی کل آر این اے کو 5′-فاسفیٹ سے بچھڑے کی آنتوں کے الکلائن فاسفیٹیس کے ساتھ علاج کے ذریعے ہٹا دیا گیا اور اس کے بعد Hy3 گرین فلوروسینٹ ڈائی کے ساتھ لیبل لگا کر۔اس کے بعد لیبل لگائے گئے نمونوں کو ہائبرڈائزیشن چیمبر کٹ (Agilent Technologies، Santa Clara، CA، USA) اور ایک ہائبرڈائزیشن سلائیڈ کٹ (Agilent Technologies) کا استعمال کرتے ہوئے مائیکرو رے سلائیڈوں کو لوڈ کرکے ہائبرڈائز کیا گیا۔ہائبرڈائزیشن 16 گھنٹے 56 ° C پر کی گئی تھی، پھر کارخانہ دار کی سفارشات کے مطابق مائیکرو رے دھوئے گئے۔پروسیس شدہ مائیکرو رے سلائیڈز کو پھر Agilent G2565CA مائیکرو رے سکینر سسٹم (Agilent Technologies) کا استعمال کرتے ہوئے اسکین کیا گیا۔اسکین شدہ تصاویر کو ایجیلنٹ فیچر ایکسٹریکشن سافٹ ویئر ورژن 10.7.3.1 (ایجیلنٹ ٹیکنالوجیز) کا استعمال کرتے ہوئے درآمد کیا گیا تھا اور ترمیم شدہ Exiqon پروٹوکول کی متعلقہ GAL فائل کا استعمال کرتے ہوئے ہر تصویر کی فلوروسینس کی شدت کو درست کیا گیا تھا۔موجودہ مطالعہ کے لیے مائیکرو رے ڈیٹا کو الحاق نمبر GPL32397 کے تحت GEO ڈیٹا بیس میں جمع کیا جاتا ہے۔
ٹوکسوپلازما سے متاثرہ RH یا ME49 تناؤ کے مائکروگلیہ میں بالغ exosomal miRNAs کے ایکسپریشن پروفائلز کا تجزیہ مختلف نیٹ ورک ٹولز کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ٹیومر کی نشوونما سے وابستہ miRNAs کی شناخت miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی اور 8.0 سے زیادہ عام سگنل کی شدت (log2) کے ساتھ فلٹر کی گئی تھی۔miRNAs میں، T. gondii سے متاثرہ RH یا ME49 strains کے ذریعے تبدیل کیے گئے miRNAs کے فلٹر تجزیہ کے ذریعے مختلف طریقے سے ظاہر کیے گئے miRNAs 1.5 گنا سے زیادہ پائے گئے۔
لیپوفیکٹامین 2000 (انویٹروجن، کارلسباد، سی اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے آپٹی-ایم ای ایم (گبکو، کارلسباد، سی اے، یو ایس اے) میں چھ کنویں پلیٹوں (3 x 105 خلیات/کنویں) میں خلیوں کو سیڈ کیا گیا تھا۔منتقلی شدہ خلیوں کو 6 گھنٹے تک کلچر کیا گیا اور پھر میڈیم کو تازہ مکمل میڈیم میں تبدیل کر دیا گیا۔منتقلی کے 24 گھنٹے بعد خلیات کی کٹائی کی گئی۔
شماریاتی تجزیہ بنیادی طور پر ایکسل سافٹ ویئر (Microsoft, Washington, DC, USA) کے ساتھ طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔تجرباتی جانوروں کے تجزیے کے لیے، پرزم 3.0 سافٹ ویئر (گراف پیڈ سافٹ ویئر، لا جولا، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے دو طرفہ انووا انجام دیا گیا۔ P-values ​​<0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ P-values ​​<0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P اقدار <0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ P 值< 0.05 被认为具有统计学意义. پی 值 <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P اقدار <0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔
اس مطالعے میں استعمال ہونے والے تمام تجرباتی پروٹوکولز کو سیول نیشنل یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن (IRB نمبر SNU-150715-2) کے ادارہ جاتی جائزہ بورڈ نے منظور کیا تھا۔
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.2018 میں متوقع عالمی کینسر کے واقعات اور اموات: GLOBOCAN ذرائع اور طریقے۔تشریح۔جے رک 144، 1941–1953 (2019)۔
رشید، ایس، رحمان، کے اور آکاش، ایم ایس برین ٹیومر کے خطرے والے عوامل اور ان کے علاج کی مداخلت کی بصیرت۔ رشید، ایس، رحمان، کے اور آکاش، ایم ایس برین ٹیومر کے خطرے والے عوامل اور ان کے علاج کی مداخلت کی بصیرت۔راشد، ایس، رحمان، کے. اور آکاش، ایم ایس دماغی رسولیوں کے خطرے کے عوامل اور اہم علاج کی مداخلتوں کا جائزہ۔ رشید، ایس، رحمان، کے اور آکاش، ایم ایس 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. رشید، ایس، رحمان، کے اور آکاش، ایم ایس برین ٹیومر کے خطرے کے عوامل اور علاج کی مداخلتوں کی گہری سمجھ۔راشد، ایس، رحمان، کے. اور آکاش، ایم ایس دماغی رسولیوں کے خطرے کے عوامل اور اہم علاج کی مداخلتوں کا جائزہ۔حیاتیاتی سائنس۔فارماسسٹ۔143، 112119 (2021)۔
کیٹو، آئی.، ژانگ، جے اینڈ سن، جے. انسانی orodigestive اور خواتین کے جننانگ کی نالی کے کینسر میں بیکٹیریل-وائرل تعامل: وبائی امراض اور لیبارٹری ثبوت کا خلاصہ۔ کیٹو، آئی.، ژانگ، جے اینڈ سن، جے. انسانی orodigestive اور خواتین کے جننانگ کی نالی کے کینسر میں بیکٹیریل-وائرل تعامل: وبائی امراض اور لیبارٹری ثبوت کا خلاصہ۔کاٹو I.، Zhang J. اور Sun J. انسانی معدے کے کینسر میں بیکٹیریل-وائرل تعاملات اور خواتین کی جینیاتی نالی: وبائی امراض اور لیبارٹری ڈیٹا کا خلاصہ۔ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：毒相互作用：毒相互作用：毒相互作用：据总结. کاٹو، آئی.، ژانگ، جے اینڈ سن، جے انسانی زبانی گہا کے عمل انہضام اور خواتین کی تولیدی نالی میں بیکٹیریو وائرل تعامل: مقبول بیماری سائنس اور لیبارٹری ثبوت کا خلاصہ۔کاٹو I.، Zhang J. اور Sun J. انسانی معدے کے کینسر اور خواتین کے جینیاتی کینسر میں بیکٹیریل-وائرل تعامل: وبائی امراض اور لیبارٹری ڈیٹا کا خلاصہ۔کینسر 14، 425 (2022)۔
Magon, KL & Parish, JL انفیکشن سے کینسر تک: کس طرح DNA ٹیومر وائرس میزبان سیل سینٹرل کاربن اور لپڈ میٹابولزم کو تبدیل کرتے ہیں۔ Magon, KL & Parish, JL انفیکشن سے کینسر تک: کس طرح DNA ٹیومر وائرس میزبان سیل سینٹرل کاربن اور لپڈ میٹابولزم کو تبدیل کرتے ہیں۔مہون، کے ایل اور پیرش، جے ایل فائر انفیکشن ٹو کینسر: کس طرح ڈی این اے پر مبنی ٹیومر وائرس میزبان سیل سینٹرل کاربن اور لپڈ میٹابولزم کو تبدیل کرتے ہیں۔ Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢. Magon, KL & Parish, JL انفیکشن سے کینسر تک: کس طرح DNA ٹیومر وائرس میزبان سیل سینٹرل کاربن اور لپڈ میٹابولزم کو تبدیل کرتے ہیں۔مہون، کے ایل اور پیرش، جے ایل کینسر سے انفیکشن کو فائر کرتا ہے: ڈی این اے ٹیومر وائرس میزبان خلیوں میں مرکزی کاربن اور لپڈ میٹابولزم کو کیسے تبدیل کرتے ہیں۔حیاتیات کھولیں۔11، 210004 (2021)۔
Correia da Costa, JM et al.schistosomes اور جگر کے فلوکس اور ہیلمینتھ سے وابستہ کینسر کے کیٹیکول ایسٹروجن۔سامنےاندر گرم.5، 444 (2014)۔